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染色液使用時需要注意哪些要點?
更新時間:2022-10-20   點擊次數:1278次
  染色液是一種間接的不含生物素的系統,用于檢測鼠抗IgG、IgM和兔源性一抗。對常規經福爾馬林固定,石蠟包埋的組織和冰凍組織切片中的靶抗原進行檢測。
 
  染色液的使用方法:
 
  1.DAB顯色液配制
 
  10mMTris-HCl(pH7.6)9mL+DAB(diaminobezidin3,3-二氨基聯苯胺)+0.3%(W/V)NiCl2或CoCl21mL,顯色時加入5-10mL30%H2O2混勻后立即使用。
 
  2.顯色
 
  準備好含有待測蛋白的固相膜:包括電泳、轉印、封阻、一抗(或生物素)處理、辣根過氧化酶(HRP)標記的二抗(或鏈霉親和素)處理、清洗等步驟。
 
  3.加入適量的DAB顯色液,鋪滿整個固相膜表面(可按比例增減)。
 
  4.置于平式搖蕩儀上,在室溫下孵育2至5分鐘,避免光照(暗室操作),直至棕褐色沉淀出現。
 
  5.用鑷子夾起固相膜,放進無離子水里清洗。
 
  6.空氣中晾干。
 
  7.拍照記錄。
 
  染色液的使用注意事項:
 
  1.DAB有潛在致突變作用,操作時應注意穿戴好防護用具。
 
  2.DAB溶液應低溫密封保存。如有結晶析出,應確保結晶*溶解再行使用;
 
  3.顯色工作液應現用現配,新鮮配制的工作液應為無色或淺棕色,如顏色過深,請勿使用;
 
  4.DAB在常溫下不穩定,每次取用后均應及時加蓋密封放回冰箱,以免因DAB分解影響實驗,或因滲漏造成實驗環境污染。

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